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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度有嚴(yán)格的要求。不僅要對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用的基礎(chǔ)設(shè)施進(jìn)行維護(hù)，還要定期對(duì)環(huán)境進(jìn)行清潔，防止細(xì)胞被真菌、細(xì)菌、支原體等微生物污染。
我們反復(fù)強(qiáng)調(diào)要避免細(xì)胞的支原體污染。那么，支原體對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，究竟有何種危害？本期內(nèi)容，為大家介紹支原體污染的危害。
支原體發(fā)現(xiàn)于1898年。自1956年Robinson從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體后, 國(guó)內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報(bào)道便層出不窮。支原體廣泛存在于自然界中, 有80余種。
支原體 (Mycoplamsa) 又稱霉形體，歸屬于柔膜體綱 (Mollicutes) ，共有6個(gè)屬，120個(gè)種別。支原體沒有細(xì)胞壁，不能維持固定的形態(tài)而呈現(xiàn)多形性。
對(duì)支原體進(jìn)行革蘭染色為陰性。不僅如此，支原體對(duì)青霉素這類干擾細(xì)胞壁合成的抗生素，具有天然抗性。
支原體通常附著在細(xì)胞的表面, 并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常功能, 用這些污染后貌似正常的細(xì)胞做試驗(yàn)或生產(chǎn), 將會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。
1、影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖及形態(tài)
細(xì)胞培養(yǎng)物遭受到支原體污染后，會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢，細(xì)胞病變等情況。
具體表現(xiàn)為以下幾點(diǎn)：
不僅如此，某些支原體還可在侵入細(xì)胞８小時(shí)內(nèi)，使線粒體膨脹，繼而被破壞，細(xì)胞核呈空泡化，細(xì)胞微管解聚，培養(yǎng)瓶中細(xì)胞與細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積，細(xì)胞無法傳代，甚至整個(gè)細(xì)胞群體溶解。
2、代謝和功能
支原體污染細(xì)胞的情況，在形態(tài)上變化不明顯。但需要注意的是，細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值，會(huì)有比較大的變化。更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)就變酸，培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉，進(jìn)而改變細(xì)胞代謝。
支原體對(duì)細(xì)胞代謝和功能的影響，具體體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
有研究表明，在單克隆抗體制備中，骨髓瘤或雜交瘤細(xì)胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。
3
引起染色體異常
改變?nèi)旧w組型，通?？蓪?dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。
4、影響免疫細(xì)胞產(chǎn)量
對(duì)于巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)體系，支原體會(huì)抑制干擾素的合成和降低其活性，加大了繼發(fā)感染其他細(xì)菌和病毒的幾率。也有研究表明，支原體可以通過植物血凝素，干擾淋巴細(xì)胞的刺激和分化。
為了盡可能降低細(xì)胞污染支原體的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)定期對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔。
德國(guó)MB公司的支原體祛除噴霧劑——Mycoplasma-off™，含有針對(duì)支原體的殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體。
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對(duì)于培養(yǎng)箱水槽、水浴鍋這類衛(wèi)生死角，也應(yīng)提高警惕。德國(guó)MB公司的水槽支原體預(yù)防試劑——Water Shield™，含表面活性劑、季銨鹽和絡(luò)合劑，不易揮發(fā)，可持續(xù)作用4周，按1:200比例，直接加入水中，不含醛類或疊氮化物，對(duì)細(xì)胞無毒害，但能有效預(yù)防支原體、細(xì)菌、真菌、等微生物污染 。
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